【新品推荐】AdV-hCYP2D6：高效构建自身免疫性肝炎（AIH-2）小鼠模型

一、简介

自身免疫性肝炎（AIH）是病因未明、罕见且危及生命的肝脏自身免疫性疾病，稳定、持久、操作简便可重复、高度模拟人类病理的动物模型是其机制研究与药物研发的核心前提。但传统AIH动物模型长期存在诱导流程复杂、肝炎呈短暂性、模型特异性差等痛点，难以满足长期慢性病理研究需求。

临床根据血清自身抗体谱将AIH分为两大亚型：1型AIH（AIH-1）无明确单一核心自身抗原，以抗核抗体（ANA）、抗平滑肌抗体（SMA）为特征性抗体，目前尚无公认、成熟稳定的动物模型；2型AIH（AIH-2）则以人源细胞色素P450 2D6（hCYP2D6）为唯—核心致病自身抗原，特征性抗体为1型肝肾微粒体抗体（LKM-1），正是这一明确靶点，使得构建AIH-2精准动物模型成为可行策略。在此背景下，基于hCYP2D6开发的腺病毒（AdV）造模工具应运而生，被证明是一种高效、可靠的AIH-2模型建立及疾病研究工具。

二、造模原理

hCYP2D6是AIH-2中标志性抗体LKM-1识别的核心靶抗原，利用AdV的天然嗜肝性，通过AdV-hCYP2D6将hCYP2D6精准递送至FVB或C57BL/6小鼠肝脏，可在肝脏局部触发炎症反应，为自身免疫反应发生创造条件，进而打破机体对肝脏自身抗原的免疫耐受，最终诱导出持久、稳定的慢性自身免疫性肝炎。

三、造模效果

该研究采用过表达hCYP2D6的AdV（简称Ad-2D6）成功构建AIH-2小鼠模型。

1、造模方法

1）病毒准备：将Ad-2D6稀释至5×10⁹ pfu/mL，冰上保存。

2）病毒注射：静脉注射：通过眼静脉窦（或尾静脉）注射100 μL病毒溶液（总剂量5×10⁸ pfu）至野生型FVB或C57BL/6小鼠体内；腹腔注射：静脉注射后立即进行第二次100 μL病毒溶液腹腔注射（总剂量5×10⁸ pfu）。

3）评估检测：通过血清学检测、肝脏组织病理检测、特异性免疫功能检测等综合评估AIH-2模型构建效果。（感染后第1周为急性期（病毒直接损伤），第2-4周起进入自身免疫介导的慢性期，持续数月。）

注：文献证实，单独静脉注射虽可诱导细胞浸润，但无法产生肝被膜下纤维化；而静脉+腹腔联合注射是诱发慢性肝损伤及纤维化的最佳途径。

图1. AIH-2模型构建流程（Hintermann E et al., J Vis Exp., 2012.）

2、评估检测结果

1）血清学指标

感染初期数天内，小鼠血清氨基转移酶水平急性升高；感染2-4周后，模型小鼠体内产生高滴度抗CYP2D6抗体，其表位特异性与人类LKM-1抗体相似。

2）肝脏形态改变

感染后第4周，可见模型小鼠肝脏出现特征性形态异常：肝叶融合；肝脏表面散在增生性结节；广泛被膜下纤维化，肝被膜增厚。空载AdV感染组（对照组）小鼠肝脏形态正常。

图2. 肝脏形态对比（Hintermann E et al., J Vis Exp., 2012.）

3）组织病理学检测

Ad-2D6感染组小鼠的肝脏门脉周围区与肝实质区均出现广泛且持续性的细胞浸润，而对照组小鼠无此病理改变；纤维化病变主要形成于肝被膜下区域，部分胶原束可伸入肝实质内。

图3. 肝脏组织学对比（Hintermann E et al., J Vis Exp., 2012.）

4）细胞免疫反应

分离纯化肝脏淋巴细胞，检测到hCYP2D6特异性CD4⁺、CD8⁺ T细胞显著富集于肝脏，这类hCYP2D6特异性T细胞可通过免疫显性hCYP2D6肽刺激，随后采用细胞内细胞因子染色（ICCS）检测IFNγ表达来进行鉴定。此外，hCYP2D6特异性CD8⁺ T细胞可在体内有效杀伤Ad-2D6感染的靶细胞。

图4. 肝脏hCYP2D6特异性T细胞的流式细胞术分析（Hintermann E et al., J Vis Exp., 2012.）

3、小结

该研究表明，采用AdV-hCYP2D6联合注射方案，可在野生型小鼠中稳定、高效地构建出AIH-2模型，并在血清学、组织病理和细胞免疫层面均再现了人类AIH-2的核心特征，为AIH-2疾病机制研究与药物筛选提供了可靠工具。

四、AdV-hCYP2D6造模优势

1.造模方法极简，成功率高

2.诱导慢性持续性肝炎

3.病理特征高度模拟人类AIH-2

4.免疫反应特异性强

5.可借助荧光标签可视化示踪，表达定位清晰

6.适配全维度检测方案

五、AdV-hCYP2D6应用场景

1. AIH-2发病机制研究：解析CYP2D6介导的免疫耐受打破、肝纤维化进展的分子机制。

2. 自身免疫性肝病药物筛选：抗炎、抗慢性纤维化药物的体内药效评价与候选药物筛选。

3. 免疫干预策略研发：免疫抑制剂、细胞治疗、靶向抗体等干预手段的效果验证。

4. 肝脏免疫基础研究：肝脏淋巴细胞活化、浸润、功能调控的机制探索。

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参考文献：

Hintermann E, Ehser J, Christen U. The CYP2D6 animal model: how to induce autoimmune hepatitis in mice. J Vis Exp. 2012 Feb 3;(60):3644. doi: 10.3791/3644. PMID: 22331063; PMCID: PMC3369629.

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