单纯疱疹病毒（HSV）使用时应该注意什么？常见问题解答！

单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus，HSV)属于疱疹病毒科、α疱疹病毒亚科，有HSV-1和HSV-2两种亚型。HSV感染宿主范围广，能有效感染啮齿类动物和灵长类动物等。H129是HSV-1型病毒的临床分离株，经过多年在各种动物模型的活体测试，发现其在外周神经系统以及中枢神经系统都具有严格顺向跨突触的特性。经过改造的病毒，装入荧光蛋白后可以实现高效、稳定的顺行跨突触标记神经元网络的功能。适合于神经输出环路的顺行示踪研究，在解析大/小鼠及非人灵长类、及其他各种哺乳动物和禽类实验动物的神经信息向下游输出环路的研究中极具价值。

HSV-1型H129株具有特异顺向跨突触的特性。病毒感染神经细胞后，在胞内复制并表达目的基因，子代病毒经轴突运输到突触前，跨突触进入下游神经元，开始新一轮的复制及跨突触传播等过程。

图2.利用rH129-EGFP标记小鼠腹侧被盖区（VTA的输出神经环路Science at WIPM）
 

利用示踪工具病毒进行相关神经回路标记实验，对实验员的病毒使用经验及生物安全环境有较高要求。动物实验的流程及样本取材实验必须在生物安全二级(BSL-2)实验室中完成，并符合病毒操作相关规程：

◎注射病毒，灌流的实验人员务必穿好连体防护服；

◎动物操作实验应在符合Biosafety Level-2(BSL-2)条件下进行；

◎注射后动物置于BSL-2病毒间饲养，严禁拿出；

◎被感染实验动物的解剖和样品采集必须在BSL-2级的动物房中进行；

◎所有的动物垫料、排泄物和动物尸体都应被当做生物危害物处理；

◎病毒注射过程中所涉及的器材，耗材及废液等废弃物，需统一收集，手术实验完成后及时进行消毒处理。
 

◎4℃短期保存；-80℃长期保存；每冻融一次，病毒滴度降低30%，应避免反复冻融；

◎病毒于-80℃可长期保存6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前重新测定病毒滴度。
 

◎ HSV注射滴度和注射体积一般是多少？

答：滴度为10⁹PFU/mL,中枢注射体积50-300nL左右，外周注射一般为1-3μL。

◎ HSV注射后什么时候取材？

答：HSV-1-129株为顺向跨多突触病毒，对动物具有较强感染毒性，动物注射H129后存活时间一般为3~5天(中枢注射)，动物体质不同，存活时间也有差异。外周注射存活时间延长2~4天。因此，病毒注射后，可根据环路连接级数多少在不同时间点取样。在中枢，跨突触数目经验值为：跨1~2级，需24~48小时；跨2~3级，需36~72小时；需经常查看动物状态，以免动物提前死亡，影响正常取样。

◎病毒是否可以稀释？怎么稀释？

答：可适当稀释，用无菌PBS进行稀释。
 

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