【定制服务】AAV/Lentivirus介导miRNA过表达及干扰

microRNAs是一类由内源基因编码的非编码单链RNA分子，其长度约为19-25nt，在生物发展进程中具有重要的调节作用。miRNAs主要通过参与基因的转录后调控实现对靶基因的表达调节，其在肿瘤发生发展、生物发育、器官形成、病毒防御、表观调控以及代谢等方面起着极其重要的调控作用。miRNAs具有非常复杂的调控网络，往往一个miRNA可以调控多种靶基因，而同一个靶基因也可以有很多个miRNAs来进行调节。

图1. microRNAs作用机制
 

用LV（慢病毒）构建miR-708过表达的稳转细胞系，RT-PCR验证miR-708转导效率。结果显示LN382、GBM-GY中miR-708的mRNA水平显著上调，过表达效果良好。MTT实验结果显示实验组（感染LV-miR-708）细胞存活率明显比对照组低；克隆形成实验也表明实验组的单克隆数量减少；EDU实验也显示实验组的细胞增殖显著缓慢。研究者同时将细胞系种植到体内，一段时间后从小鼠体内取出异种移植瘤，瘤重量和ki-67数据表明miR-708可以抑制胶质瘤的发生。

 

服务说明

miRNA的功能研究可通过病毒载体AAV、LV介导的过表达和干扰技术来实现。miRNA-AAV/LV过表达，MicroRNA过表达载体的构建可以采用miRNA的前体序列作为目的基因插入载体,也有研究采用的是包含microRNA前体序列两端的侧翼序列在内的核苷酸并经基因组DNA扩增后作为目的基因插入到AAV或者LV病毒载体中，生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。miRNA-AAV/LV干扰，采用反义寡核苷酸抑制其活性或下调其表达水平。设计构建到AAV或者LV病毒载体中，生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。

服务流程

1、客户提交miRNA资料（ID号或者序列）、构建要求
2、miRNA过表达载体、干扰载体构建
3、病毒包装
4、稳定细胞株构建（根据客户需要选择，需要客户提供目标细胞）

需客户提供内容/材料

1：过表达的目的基因模板（质粒/菌液）或基因序列（基因ID）；干扰的目的基因序列（基因ID）或干扰序列/载体；
2：病毒类型选择以及要求；
3：血清型选择。

最终交付

1：载体构建报告；
2：合同约定的rAAV/慢病毒的滴度和病毒量；
3：质检报告；
4：测序文件；
5：过表达、干扰质粒/病毒/稳定细胞系。
注：过表达筛选保证3条里面有1条干扰效率达到70%以上。
 

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