简介

      长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）是一类长度大于200nt的非编码RNA分子，主要位于细胞核中，少量位于细胞质内。lncRNA在基因表达调控、物种进化、胚胎发育、物质代谢以及肿瘤发生等过程中均具有重要作用。

      根据它们在基因组上相对于蛋白编码基因的位置，主要可以分为以下5种，其所在的位置与其功能有一定的相关性。

类别	描述
正义lncRNA	与编码基因的一个或多个外显子重叠
反义lncRNA	与相反链上的转录产物部分或完全互补
内含子lncRNA	由基因的内含子产生
双向转录产物	与蛋白质编码基因共享相同的启动子，但转录方向相反
基因间 lncRNA	由位于蛋白质编码基因之间的序列独立转录

lncRNA的主要作用机制

（1）通过在蛋白编码基因上游启动子区发生转录，干扰下游基因的表达；

（2）通过抑制RNA聚合酶Ⅱ或者介导染色质重构以及组蛋白修饰，影响下游基因表达；

（3）通过与蛋白编码基因的转录本形成互补双链，进而干扰mRNA的剪切，从而产生不同的剪切形式；

（4）通过与蛋白编码基因的转录本形成互补双链，进一步在Dicer酶作用下产生内源性的siRNA，调控基因的表达水平；

（5）通过结合到特定蛋白质上，lncRNA转录本能够调节相应蛋白的活性；

（6）作为结构组分与蛋白质形成核酸蛋白质复合体；

（7）通过结合到特定蛋白上，改变该蛋白的胞质定位；

（8）作为小分子RNA，如miRNA、piRNA的前体分子转录。

      lncRNA在胚胎发育、谱系分化、基因印迹、疾病发生等过程中都发挥着非常重要的调控作用，是转录调控的重要分支及热点。随着转录组学高通量测序技术的日臻完善，越来越多的lncRNA被发现。但是目前对lncRNA的认知还处在初级阶段，仍需要探索。

 

lncRNA的功能检测

      lncRNA的功能研究主要采用敲减，过表达等实验手段。lncRNA的敲减是利用RNA干扰(RNA interference, RNAi)方法,即由小干扰RNA(small interfering RNAs, siRNAs)和短发夹RNA(short hairpin RNAs, shRNAs)介导的特异性降解同源RNA,该方法是lncRNA功能研究中最主要、最常见的技术之一。由于绝大多数lncRNA的表达丰度偏低,在组织细胞中过表达lncRNA也是研究其功能的一个有效策略。

 

服务说明

      枢密科技提供rAAV-LncRNA、rLV-LncRNA等lncRNA过表达载体和干扰载体构建服务，同时可选择携带各种荧光报告基因或抗性基因，适用于普通真核表达、腺相关病毒包装、慢病毒包装与稳转细胞系建立等多种用途。
 

服务流程

        1、客户提交lncRNA资料（ID号或者序列）、构建要求

        2、lncRNA过表达载体构建

        3、病毒包装

        4、稳定细胞株构建（根据客户需要选择，需要客户提供目标细胞）
 

载体选择

 

lncRNA敲减服务注意事项：

        1. 大部分lncRNA的本底表达丰度偏低，在进行干扰服务之前需检测本底表达情况。

        2. 不是所有lncRNA通过shRNA敲减技术就能达到期望的干扰效果。一方面大部分lncRNA分布在细胞核内，而RISC沉默复合物主要在细胞质里面，针对细胞核里面的lncRNA，目前的shRNA技术达不到干扰效果。另一方面有些细胞质的lncRNA也存在难以敲降的情况，lncRNA设计6-8条筛选不出来有效的干扰序列，那么可以判定该lncRNA很难被敲低。针对此情况建议采用siRNA（反义核酸），Cas13d等方式进行抑制。

 

交付内容：

        1. 质检报告

        2. 测序文件

        3. 过表达、干扰质粒/病毒/稳定细胞系
 

参考文献：

1. Ling-Ling Chen.（2015）.Linking Long Noncoding RNA Localization and Function. Trends in Biochemical Sciences.

2. Ming-zhe Ma, Yan Zhang.,et al.(2016).Long Noncoding RNA GCASPC, a Target of miR-17-3p, Negatively Regulates Pyruvate Carboxylase–Dependent Cell Proliferation in Gallbladder Cancer. Cancer Research.

3. XIA Tian, XIAO Bing-Xiu.,et al.(2013).Acting mechanisms and research methods of long noncoding RNAs. HEREDITAS

4. Feng Yang, Fan Yi.,et al.(2014)The emerging landscape of long non-coding RNAs. HEREDITAS

5.Johnny T. Y. Kung, David Colognori.,et al.(2013).Long Noncoding RNAs: Past, Present, and Future. Genetics.

6.Longyang Jin, Qiang Cai.,et al.(2018) .Long noncoding RNA MEG3 regulates LATS2 by promoting the ubiquitination of EZH2 and inhibits proliferation and invasion in gallbladder cancer. Cell Death & Diseasevolume.

7. Yiwen Fang,Melissa J.,et al.(2016)Roles, Functions, and Mechanisms of Long Non-coding RNAs in Cancer.Genomics, Proteomics & Bioinformatics.


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