AAV、VSV和 LV在猕猴上的应用

1737 人阅读发布时间：2023-06-14 11:00

本文将具体侧重介绍腺相关病毒（Adeno-associated virus, AAV）、水泡性口炎病毒（Vesicular Stomatitis Virus，VSV）和慢病毒（Lentivirus，LV）在猕猴上表达的效果，三者之间的差异比较，以及AAV注射相关问题。

一、表达效果

病毒类型：AAV（腺相关病毒）
注射脑区：丘脑（MD），皮层（Cortex），腹外侧前额叶皮层（vlPFC）
表达天数：45天，75/110天
表达情况：神经元胞体标记良好，神经轴突纤维标记良好。

病毒类型：VSV（水泡性口炎病毒）
注射脑区：丘脑（MD），皮层（Cortex）
表达天数：5天，30天
表达情况：胞体标记良好，近端神经突标记，无长程轴突纤维标记(5天)；轴突丢失、神经元死亡(30天)。

病毒类型：LV（慢病毒）
注射脑区：丘脑（MD），皮层（Cortex）
表达天数：260天
表达情况：胞体标记良好，无长程轴突纤维标记。

二、三种病毒的表达比较

小结：AAV良好标记神经元胞体以及纤维；VSV良好标记神经元胞体和近端纤维，不标记远端轴突，且随着时间的发展发生细胞死亡；LV良好标记胞体，不标记轴突。

三、表达特异性

如下图所示，AAV2/9-CaMKIIα-Tau-GFP 带有兴奋性神经元特异性启动子，并通过GFP标记感染细胞。作者通过免疫荧光染色，检测GFP与神经元标志物NeuN和星型胶质细胞标志物GFAP的共标情况，可以看到病毒特异性标记神经元细胞。

四、安全性

在本实验中，研究人员在食蟹猴脑注射病毒后，在AAV表达时长长达110天后进行实验（且无报道异常），说明感染AAV后猴可以存活至少110天。

M：雄性；F：雌性；MD：内侧丘脑；vlPFC：腹外侧前额叶；UbC：人泛素C；hSyn：人突触蛋白I；CaMKII：钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II；d：天

五、滴度、剂量

本实验中AAV来源于枢密科技，病毒滴度高达8.47x10¹³vg/mL，表达时间长，安全性高，特异性标记神经元细胞。位点注射剂量为10-20μL。
病毒注射: 注射速度从200纳升/分钟开始，增加到400纳升/分钟；总注射量为10-20微升。