溶瘤病毒改造一站式CRO服务

背景介绍

溶瘤病毒（Oncolytic Viruses, OVs）是一类天然特性或基因工程改造后能特异性识别并感染肿瘤细胞的病毒颗粒，其溶瘤机制主要有两个方面：一是直接溶瘤效应，即利用肿瘤细胞抑癌基因缺陷的特性在肿瘤细胞内高效复制，进而裂解癌细胞并释放子代病毒，扩散感染邻近肿瘤组织；二是免疫激活效应，即释放肿瘤相关抗原及免疫刺激因子（如GM-CSF、干扰素等）来重塑微环境。此外溶瘤病毒疗法与免疫疗法的结合也得到了广泛研究与应用。

溶瘤病毒的改造主要通过剔除或替代毒性基因以增加病毒的安全性、提高对肿瘤的靶向性以及增强抗肿瘤效应等，从而实现复制速度快、细胞病变效应好、选择性破坏癌组织而不对正常组织造成过度损害等目标。

目前，开发用于肿瘤治疗的溶瘤病毒类药物已有数十种，分为DNA病毒和RNA病毒,以下为不同溶瘤病毒的特征情况分析：

不同溶瘤病毒的特征（表格来源：Lin D et al, Signal Transduct Target Ther., 2023）

溶瘤病毒改造一站式CRO服务

枢密科技专注于为全球客户提供病毒载体、蛋白及疫苗领域的一站式CRO/CDMO服务。目前已开发溶瘤病毒改造一站式CRO，依托定制化改造、工艺开发、药效评价三大技术服务平台，构建溶瘤病毒改造全链条服务体系，助力客户加速溶瘤病毒药物的研发与产业化。

溶瘤病毒的遗传修饰（图片来源：Lan Q et al, Front Med., 2020）

1.理想的OVs应具有以下特点

• 复制速度快，细胞病变效应高
• 选择性破坏癌组织而不对正常组织造成过度损害

2.我司OVs改造的方向

• 提高溶瘤病毒的肿瘤靶向感染性
• 降低风险、增加安全性
• 增强抗肿瘤效应
• 监测OV复制

服务项目

01 溶瘤病毒毒株的突变及重组毒株构建；

02 高品质、高活性溶瘤病毒产品生产及制备；

03 候选溶瘤病毒产品药效评价一站式服务。

依托于三大技术平台的服务体系

平台一：溶瘤病毒改造平台提供定制化服务

枢密科技已成功开发了多种溶瘤DNA病毒和RNA病毒改造技术，涵盖了病毒毒株的重组、突变、拯救以及扩增等关键环节。其中所设计的病毒类型丰富多样，包括但不限于单纯疱疹病毒（Herpesvirus，HSV）、腺病毒（Adenovirus，AdV）、牛痘病毒（Vaccinia Virus，VACV）、水泡性口炎病毒（Vesicular Stomatitis Virus，VSV）及呼肠孤病毒（Reovirus，ReV）等，可提供广泛而深入的技术支持与服务，满足不同客户在溶瘤病毒研究与开发过程中的多样化需求。

1 病毒类型简介

（1）单纯疱疹病毒（HSV）

HSV因具备感染宿主范围广、复制周期短以及基因组容量大的特点，已成为溶瘤病毒研究领域中常用的病毒载体之一。在对HSV改造时，一些常用的位点包括ICP34.5（RL1）、ICP47、US11、TK等。

枢密科技拥有来源清晰的HSV-F株，HSV-KOS株，HSV-129株，能够针对特定基因进行敲除，从而使病毒具备肿瘤选择性。此外，还可以插入外源基因，如粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、P53、PD1等，可增强免疫反应。

（2）腺病毒（AdV）

AdV在溶瘤病毒研究领域有着广泛应用，常见的改造位点包括E1A-CR2、E1B-55K、E1B-19K等。此外，还可以通过肿瘤组织特异性启动子驱动E1A等基因以增强病毒对肿瘤的靶向性。AdV还可以作为载体，用于构建携带外源免疫相关基因（如IL-12，IFN-γ，GM-CSF等）的重组病毒，从而激发机体对肿瘤的免疫反应。在临床应用中，AdV溶瘤病毒还可以与传统放疗/化疗或生物疗法（如单抗、CAR-T等）联合使用，通过多种途径的协同作用，增强对肿瘤细胞的杀伤效果。

枢密科技拥有来源清晰的AD5，能够针对E1区、E3区、Fiber区等关键区域进行定制化改造，以满足不同研究和治疗需求。

（3）牛痘病毒（VACV）

溶瘤痘苗病毒对肿瘤具有天然的趋向性，为了进一步提升靶向性和特异性，目前主要采用两种改造方式：缺失痘苗病毒生长因子(Vaccinia Growth Factor, VGF)和缺失胸腺激酶(Thymidine Kinase, TK)。在现有的VV中，Western Reverse株、Lister株、Wyeth株和Copenhagen株被证实具有溶瘤特性，其中Western Reverse株溶瘤能力尤为突触。枢密科技选用Western Reverse（WR）株，针对其J2R（TK）、A56R（血凝素）、F14.5等特定基因进行精准敲除，从而使其具有肿瘤选择性。同时，通过插入外源基因，如粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、白介素-6（IL-6）等，可以显著增强机体的免疫反应，提高溶瘤效果。

（4）水疱性口炎病毒（VSV）

VSV具有复制周期短、组织嗜性广以及人类自然感染概率低等优点。VSV溶瘤病毒的策略是巧妙地利用VSV对Ⅰ型干扰素反应的敏感性。由于肿瘤细胞中存在Ⅰ型干扰素信号通路的缺陷，无法有效抑制VSV的复制和扩散，因此病毒能够在肿瘤细胞中选择性地增殖并发挥溶瘤作用。

枢密科技拥有来源清晰的Indiana VSV毒株，并且具备成熟的基于反向遗传学的oVSVs重组改造、拯救及扩增技术，能够为相关研究和应用提供有力支持。

（5）呼肠孤病毒（ReV）

ReV根据红细胞凝集活性MRV分为三种血清型：血清1型（T1L，Long）、血清2型（T2J，Jone）和血清3型（T3D，Dearing；T3A，Abney）。其中，无论野生型或改造后的呼肠孤病毒都能实现溶瘤作用。在临床研究中，主要采用野生型呼肠孤病毒联合其他抗癌疗法的方式进行治疗。

枢密科技拥有血清3型呼肠孤病毒毒株，并且可以根据需求对ReV进行改造,以进一步提高其肿瘤靶向性和安全性，满足不同研究和治疗需求。

2 溶瘤病毒定制化改造服务流程简介

客户提供:

• 病毒毒株或种类；
• 病毒基因组改造位点及改造类型（缺失、突变、插入、有无特殊启动子要求），最好直接提供插入基因的序列；
• 病毒滴度和总量需求。

3 溶瘤病毒定制化服务周期

平台二：溶瘤病毒产品工艺开发平台

1 工艺开发平台

枢密科技针对不同溶瘤病毒的独特拯救及培养特性，开发出一系列工艺优化方法，构建了完备的工艺开发平台。该平台涵盖了从病毒拯救到最终产品制备的全流程，确保工艺的高效性、稳定性和可重复性。

• 重组病毒拯救
• 病毒挑斑纯化
• 工艺培养
• 纯化工艺优化

2 不同溶瘤病毒改造、拯救、纯化及感染性测试

平台三：药效评价技术平台

枢密科技药效评价技术平台可提供溶瘤病毒产品功效、安全性和作用机制评估。我们有丰富的细胞模型和动物模型资源，可有效支持溶瘤病毒产品的体内疗效评估。

01 体外药效评价平台

枢密科技具备丰富的肿瘤细胞系资源，涵盖HeLa、HCT116、HuH-7、HepG2、A549、A431、TE671、K562等多种常用细胞系，同时提供个性化细胞系定制服务，以满足不同客户的特定研究需求。可提供各类溶瘤病毒产品药效评价实验服务，包括但不局限于细胞杀伤、转基因表达以及生物标志物表达等评价实验。

02 体内药效评价平台

枢密科技具备成熟的疾病动物模型体系，涵盖同系肿瘤模型、异种移植模型以及自发肿瘤模型等多种类型，可用于全面评估溶瘤产品临床前功效、安全性和作用机制。拥有专业的研发团队和先进的实验设施，能够根据客户的特定需求，建立精准的动物模型，并通过系统的实验设计和严格的评估标准，对溶瘤病毒产品的有效性和安全性进行科学、客观的评价，助力客户加速推进其产品的临床前研究进程。

溶瘤病毒在不同癌细胞中的效果评估

现货溶瘤病毒产品清单