平板克隆形成实验

        克隆形成实验检测每一个细胞扩增为一个克隆的能力，是一种在体外条件下评估细胞生存能力和增殖能力的方法。

实验步骤：

DAY1

       制备单细胞悬液，加到六孔板，每组依次（100/200/400个细胞），每孔2mL培养基，培养过夜。

DAY2-3

       加药处理48小时。

DAY4-?

       培养2-3周直到形成克隆（认为超过50个细胞的群是一个克隆），每2-3天换一次液，拍照，计数。

 mitomycin C：属烷化剂，为生物还原性抗生素，可与DNA发生交叉联结，使DNA解聚，阻止DNA的复制过程。mitomycin C为细胞周期非特异性药物，作用于G1、G2及M期，并对S/G2期有延缓作用。10μM丝一裂一霉一素一C (Mitomycin C)处理宫颈癌细胞系HeLa细胞，对照组添加等量DMSO，48小时后撤掉药物，培养一段时间后，细胞形成克隆，比较两组克隆数可知丝一裂一霉一素一C抑制了HeLa细胞增殖。

       细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞是能够贴壁并且有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力。
 

平板克隆实验检测沉默RSF-1的乳腺癌细胞系MCF-7/SKBR3的增殖能力（Oncol Lett. 2018 Oct; 16(4): 4279–4284.）

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