枢密科技测试：rAAV/Retro逆标效率

逆行标记效率高

        经典血清型提高了100倍以上，甚至可以达到染料和Retrobead类似的逆标效率。

应用广泛

        1.rAAV/Retro 可以轻松表达出所携带的目的基因。

        2.临床应用中也有巨大潜力,可与其他神经示踪病毒结合使用，特异性解析神经环路问题。针对性地进行神经元群的基因编辑等多样性的基因治疗。

图1:特异标记皮层第五神经元的转基因CRE小鼠（Rbp4_KL100Cre）
 

        脑桥基底核定位注射rAAV-Retro-DIO-CAG-tdtomato和rAAV-CAG-EGFP病毒。rAAV-Retro-DIO-CAG-tdtomato病毒逆向感染投射至注射位点的皮层第五层Cre阳性投射神经元细胞，从而使皮层-脑桥基底核投射表达红色荧光；rAAV-CAG-EGFP病毒感染注射位点的基地核的神经细胞胞体，进而使基地脑桥核-小脑投射表达绿色荧光。

测试病毒：增强版en-Retro AAV-syn-cre  和  Retro AAV-syn-cre

实验动物：C57 小鼠，每组n=3

实验方案：比较增强版en-Retro AAV-syn-cre与Retro AAV-syn-cre

多脑区病毒表达情况（retro血清型）

已知VTA-NAc有明显投射，在Nac分别注射增强版或常规retro-AAV-syn-cre 300nl，在VTA注射rAAV9-CMV-dio-EGFP（稀释5倍，即2e+12 vg/ml）300nl，ACC注射300nl，注射4w后灌流取材，比较EGFP荧光表达范围和亮度。
 

测试位点：

Nac （AP: 1.50mm, ML: 1.05mm, DV: -4.40mm）

VTA （AP: -3.20mm, ML: 0.45mm, DV: -4.30mm）

ACC（AP: 0.75mm, ML: 0.3mm, DV: -1.50mm）

预计测试时间：2020.7.2

测试结果：

图2 第一组小鼠不同脑区病毒表达
 

结果：小鼠在ACC和VTA脑区病毒的表达显示增强版en-Retro AAV病毒的启动效率显著高于Retro AAV。
 

图3 第二组小鼠不同脑区病毒表达

结果：小鼠在ACC和VTA脑区病毒表达也可说明增强版en-Retro AAV病毒的启动效率高于Retro AAV。
 

图4 第三组小鼠不同脑区病毒表达

结果：小鼠在ACC和VTA脑区病毒表达仍显示增强版en-Retro AAV病毒的启动效率高于Retro AAV。

结论：
        测试结果显示VTA-Nac脑区的投射效率比ACC-Nac的投射效率要高，注射增强版en-Retro AAV病毒小鼠的荧光表达范围要比注射Retro AAV病毒小鼠的荧光表达范围广、标记数目多，且主要在VTA脑区体现，本次测试中显示Retro血清型增强版en-Retro AAV病毒工作效率高于Retro AAV。